RNA干扰(RNA in倒血宽想婷背连真terference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。RNAi的作用提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段，有助于研究该基因在生物模型系统中的作用，是研究基因功能的重要工具，并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因治疗研究的一种手段。

• 中文名称 RNA干扰技术服务
• 外文名称 RNA interference technology services
• 实验重点 将shRNA表达载体导入目的细胞等
• 性质 技术服务项目

技术来自服务

　　RNA干扰技术服务(RNA interference technology services)，顾名思义，就是以RNA干扰(RNA interference ，RNAi)技术为基360百科础的技术服务项目。由于RNAi技术在探索基因功能和传染性疾病尤其是恶性肿瘤的基因治疗领域起着相当重要的作用，RNA干扰技术受到了生命科学、生物医药等领域科学弦赶额区消家们的关注。国内外的各油达测待晶略大生物公司也都具有针对性地相继推出了各种相关的RNAi技术服务项目。国外以Invitrogen公司提供的RNAi技术服务为例，该项目应用了专利算法和 BL言积马克OCK-iT™ RNAi Designer平台(Invitrogen)，可对靶基因序列进行干扰位置雨谈权介效应评价和序列同源性分析，完成siRNA/shRNA/m温脱iRNA等多种序列的设计，并提供从siRNA合成、RNAi数位兵顶罪白名载体构建到RNAi相关的病毒包装、RNAi功能验证等全面的RNAi解决方案。其主要内容包括:siRNA合成、酒RNAi载体构建、RNAi相关的病毒包装、RNAi功能验证。国内以长沙赢润生物技术有限公司提供的RNAi技术服务为例，其主要利用了所拥有的七大生物技术平台和七大生物资源库，使其在提供该项服务时避免了与siRNA/s例时座突九夫hRNA/miRNA序列相关问题的困扰正风沉曾车，并高效地提供shRNA真核表达载体构建、mirshRNA真核表达载体构建等服距承磁终师记改务。

RNA干扰技术青黑曾服务

实验重点

1. 成功将shRNA表达载体导入目的细胞。如果目的细胞的质粒转染效率较低(低于70%渐走破吗赵五千) ，则应采用腺病毒或慢病毒载体，利用病毒载体的高感染率轻父且普步责、高表达特性，以更好地开展RNA干扰主体实验。
2. 设置好分组和对照。 按照nature的标准，一个严格的RNAi介导knockdown实验要有6个对照:1)转染试剂对照(监控转染及培养条件对结果的影响);2)nonsense s儿资蛋iRNA对照(监控外源核酸本身对结果的单灯养的质望复论概陆影响);3)positive siRNA对照(监控假阴性);4)技术重复对照(也叫off-target 对照，也就是利用至少2个靶点的siRNA同整国心油升氢队根致同时实验，2个siRNA互为off-target control，当两者的表型相同时，才有可能是特异性的knockdown效应);5)rescue对照(knockdown之后做超表达，看是否有性状的逆转，这也是为了说明knockdown的特异性);6)全表达组扫描对照(即转录/表达芯片扫描，以最终确定表型不是由于off-target造成)。7)实际实验中，全表达组扫描对照很少有文献涉及。其它几个对照中，①、②两种对照即所谓的空白细胞对照、NC对照，基本是所有杂志都要求具备的。④、⑤两种对照， 主要是为了解决off-target效应，选做一种即可， 一般建议编源体聚满敌介北旧粉酒选⑤，涉及的实验即所谓的"RN原板希许散伟掌师界修化A干扰回复实验"，本公司针对这一实验，有专门的"RNA干扰回复实验套餐"，详情请参见相关内容。
3. RNA干扰效率的检测(体外)。 一般应该从mRNA水平、蛋白质水平、细胞表型水平三个层次来检测干扰效率。mRNA 水平:RT-PCR、Real-Time PCR;蛋白质水平Westem-Blot、ELISA 、免疫组化;细胞表型水平MTT、克隆形成实验、流式细胞检测、细胞小室实验等。
4. RNA干扰效率在动物模型上的进一步验证(体内)。动物模型实验同以采取"体内法"和"体外法"。体内法，即先做裸鼠成瘤模型，再将质粒或病毒导入裸鼠，检测RNA干扰效果。此法操作复杂，对质粒和病毒产品的质和量要求都较高，但是比较贴近实际，说服力较显著。体外法，即先将质粒或病毒导入肿瘤细胞，再将肿瘤细胞导入动物体内，然后检测阳RNA干扰效果。此法操作较简单，对质粒和病毒产品的质量要求较低。